穩定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒

Steady Firefly Luciferase reporter Assay Kit

產品原理：

螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是一種以熒光素(luciferin，也稱螢光素)為底物， 檢測熒光素酶(firefly luciferase， 也稱螢光素酶)活性的試劑盒。螢火蟲熒光素酶是一種分子量約為61 KD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下， 可以催 化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的過程中，會發出生物發光(bioluminescence)。生物發光可以通過化學發光儀(luminometer)或液閃測定儀進行測定。

通過熒光素和熒光素酶這一生物發光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達。通常把所研究基因的轉錄調控元件或 5’啟動子區克隆在luciferase基因的上游，或把3’-UTR區克隆在luciferase基因的下游， 構建成報告基因(reporter gene)質粒，然后轉染細胞，用適當方法處理細胞后，測定熒光素酶的活性。通過熒光素酶活性的高低，來判斷處理方法對目的基因的轉錄調控的影響。

保存條件：

-20oC避光保存6個月有效，-80oC避光保存，一年有效。盡量避免反復凍融。

使用方法：

1. 室溫下融解穩定型熒光素酶檢測試劑，同時將培養好的細胞從培養箱中取出，在二者都達到室溫且溫度*時，開始下一步實驗；

2. 向細胞加入與培養基等體積的穩定型熒光素酶檢測試劑，并在室溫下平緩振搖孵育至少5分鐘，以使細胞充分裂解，此過程可以用錫箔紙覆蓋避光。不論細胞培養在何種器皿中，加入與培養基等體積的熒光素酶檢測試劑即可；

3. 開啟化學發光儀或具有檢測化學發光功能的多功能酶標儀，設置適當參數；

4. 進行讀數，可以直接在96孔板或384孔板中讀數，也可以吸出100-200微升到發光管中進行讀數。本產品信號值非常穩定，半衰期大于5小時，可達到高通量篩選的要求。

螢光素酶報告基因的主要優點：

穩定型螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒的優點

1. 靈敏度高，zui低可檢測10^‐20摩爾熒光素酶分子，比Western Blot靈敏度高1000倍以上；

2. 檢測范圍廣，在10^-16 M(10 pg/L)至10^-8 M(1 mg/L)范圍內,光強度與熒光素酶濃度成正比；

3. 發光檢測，檢測方便，內源性低，哺乳動物無內源性表達，熒光素酶檢測不受細胞內其他物質影響；

4. 試劑盒成分經過優化處理，可以使信號值保持長時間穩定，半衰期大于5小時，非常適合高通量篩選的要求。

主要應用領域

1、啟動子核心區域檢測，增強子/抑制子等調控子核心元件檢測；

2、啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用，啟動子區可能的轉錄因子結合位點檢測；

3、細胞信號轉導途徑研究；

4、病毒/細胞相互作用；

5、藥物等化學誘導因素或射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節（抑制或增強）。

注意事項：

1. 常見培養基如RPMI1640、DMEM、F-12、MEM等，以及酚紅、血清、PBS和其他緩沖液等，都不影響熒光素酶檢測試劑的使用。穩定型熒光素酶檢測試劑經過成分優化處理，可使信號值保持穩定，半衰期大于5小時，非常適合高通量篩選的要求。

2. 由于溫度對酶反應有影響，所以樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。

3. 為保證熒光素酶檢測試劑的穩定，可以采取適當分裝后避光保存的方法，以避免反復凍融和長時間暴露于室溫；經測試，反復凍融三次，對測定結果無明顯影響。

4. 細胞如果在96孔或384孔板中直接讀數，需要使用白色或黑色不透明的培養板，以免發生孔與孔之間的信號干擾。

5. 為避免由于質粒轉細胞時效率的差異而帶來的誤差，可以同時轉入海腎熒光素酶(Renilla luciferase)的報告基因質粒或β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)的報告基因質粒等作為內參。

6. 本產品*于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常見問題：

1. Luminometer和熒光分光光度計有何不同？ 熒光分光光度計檢測的樣品本身不能發光，樣品需要由特定波長的激發光激發，然后才能產生熒光并被熒光分光光度計檢 測。Luminometer檢測的樣品本身可以發光，不需要激發光進行激發。也就是說luminometer是檢測化學發光(螢光)的儀器。有些型號的熒光分光光度計也具有luminometer的功能，即也可以檢測化學發光。您所使用的熒光分光光度計能否用于化學發光的測定請仔細閱讀該儀器的說明書，或咨詢儀器供應商。

2. 可以進行ATP化學發光檢測的儀器是否就可以用于本試劑盒的檢測？ 是。ATP化學發光的檢測原理和本試劑盒的原理相同，可以用相同的儀器測定。