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    中國藥典（2020年版）第一增補版解決方案-氨基酸分析篇
    
							
    
								來源：科諾美（北京）科技有限公司  
								2026年01月30日 16:38  
                                
    
    
    
        
							
    
						
    
						
    
							
    氨基酸是人體蛋白質的基本組成物質，除個別芳香族氨基酸外，紫外吸收均較弱，直接使用紫外檢測器檢測靈敏度低。故氨基酸分析通常需要選擇合適的衍生試劑增加氨基酸的生色團，再使用紫外檢測器進行檢測。目前氨基酸衍生主要包括柱前和柱后衍生兩種方法。

    柱前衍生化的高效液相色譜法以其操作簡單、分析速度快、靈敏度高等優點，成為藥典中氨基酸的主要分析方法。常見的柱前衍生試劑有異硫氰酸苯酯（PITC）、6-氨基喹啉-N-(羥基琥珀酰亞氨基)氨基甲酸酯（AQC）、鄰苯二醛（OPA）、9-Fmoc-Cl 和2,4-二硝基氟苯（DNFB）等。柱前PITC衍生氨基酸測定法分離效果好，方法技術成熟，適用于含氨基酸種類較多的樣品分析。

    本方案使用 Leaps超高效液相色譜系統，采用柱前PITC衍生氨基酸測定法對氨基酸注射液以及氨基酸加鋅口服液進行分析，測定結果和產品標示值一致，方法穩定可靠。


    儀器配置


    01
    儀器

    中國藥典（2020年版）<a class=

    Leaps超高效液相色譜系統


    Leaps四元泵（P40）
    Leaps標準型自動進樣器（A10）
    Leaps 標準加熱型柱溫箱（C10）
    Leaps紫外-可見檢測器（D10）

    02
    色譜條件

    Chromai Lotus C18（4.6*250 mm, 5 μm）(貨號：3.1.04.0009)

    流動相A：乙腈-0.1 mol/L醋酸鈉溶液（取醋酸鈉13.6 g，加水900 mL溶解，用醋酸調pH至6.5，加水至1000 mL）（7:93）

    流動相B：乙腈-水（80:20）

    檢測波長：254 nm；

    柱溫：40 ℃；

    流速：1 mL/min；

    梯度洗脫：
    時間（min）
    流動相A（%）
    流動相B（%）
    0
    100
    0
    14
    85
    15
    29
    66
    34
    30
    0
    100
    37
    0
    100
    37.1
    100
    0
    45
    100
    0

    實驗結果和討論


    01
    標準溶液色譜圖

    PITC衍生氨基酸標準溶液譜圖，如圖1所示

    中國藥典（2020年版）<a class=
    圖1 氨基酸標準溶液色譜圖

    02
    線性范圍及重復性結果

    將不同濃度的系列標準工作溶液分別進樣，得到并繪制標準曲線，在線性范圍內，線性相關系數均大于0.999，且6針標準溶液保留時間和峰面積的重復性結果良好。

    表1 線性范圍及重復性結果
    化合物名稱
    線性范圍μg/mL
    R^2
    重復性
    保留時間RSD%
    峰面積RSD%
    天冬氨酸
    7.14~35.71
    0.9994
    0.089
    0.337
    谷氨酸
    4.62~23.10
    0.9997
    0.084
    0.336
    絲氨酸
    3.45~17.26
    0.9999
    0.099
    0.163
    甘氨酸
    7.04~35.18
    0.9999
    0.095
    0.204
    組氨酸
    5.62~28.10
    0.9999
    0.082
    0.253
    精氨酸
    6.90~34.52
    0.9998
    0.063
    0.265
    蘇氨酸
    8.00~40.00
    0.9998
    0.045
    0.245
    丙氨酸
    11.37~56.85
    0.9998
    0.046
    0.256
    脯氨酸
    5.12~25.60
    0.9998
    0.023
    0.382
    絡氨酸
    2.96~14.82
    0.9999
    0.046
    0.262
    纈氨酸
    6.12~30.60
    0.9998
    0.013
    0.379
    蛋氨酸
    2.83~14.17
    0.9999
    0.023
    0.280
    異亮氨酸
    3.19~15.95
    0.9999
    0.012
    0.226
    亮氨酸
    11.90~59.52
    0.9999
    0.009
    0.217
    苯丙氨酸
    5.95~29.76
    0.9999
    0.025
    0.151
    賴氨酸
    14.86~74.29
    0.9999
    0.023
    0.150

    03
    樣品測試結果

    對氨基酸注射液和氨基酸加鋅口服液同樣采用柱前PITC衍生法進行氨基酸測定，得到樣品譜圖如圖2和圖3所示，氨基酸測定結果與產品標示值一致。連續進樣六針樣品溶液，各氨基酸濃度結果RSD%均小于1%，方法穩定可靠。

    中國藥典（2020年版）<a class=
    圖2 氨基酸注射液測試譜圖

    中國藥典（2020年版）<a class=
    圖3 氨基酸加鋅口服液測試譜圖


    總結



    采用 Leaps 超高效液相色譜系統，搭配紫外檢測器，采用柱前PITC衍生氨基酸測定法，16種氨基酸在線性范圍內，線性相關系數均大于0.999。并對氨基酸注射液以及氨基酸加鋅口服液進行分析，測定結果和產品標示值一致，且六針樣品重現性測試中各氨基酸濃度結果RSD%均小于1%，方法穩定可靠。

    
						
    
					
    
					
					
    
						
						  
    
							
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