江蘇知原藥業通過IVRT與IVPT試驗在地奈德乳膏和洗劑生物等效性BE研究

2025年10月3日江蘇知原藥業股份有限公司的Om Sambhaji Shelke研究團隊在《Journal of Pharmaceutical Innovation》（IF=5.2）期刊發表了一項題為“IVRT and IVPT of Desonide Lotion and Cream: Correlation with Human Bioequivalence Study”研究。針對外用制劑傳統臨床終點生物等效性研究成本高、耗時長、流程復雜的問題，開發并驗證了地奈德（Desonide）乳膏和洗劑的體外釋放試驗（IVRT）與體外滲透試驗（IVPT）方法，結合皮膚發白試驗，建立了外用制劑的生物等效性評估體系。

摘要

背景：外用生物等效性（BE）研究對于批準價格親民且安全性和有效性與原研藥相當的仿制藥很重要。然而，外用制劑的傳統臨床終點研究成本高昂、耗時漫長且流程復雜。本研究探索了體外釋放試驗（IVRT）和體外滲透試驗（IVPT）方法，并通過生物等效性研究進一步評估制劑。

方法：IVRT方法以pH 4.0醋酸緩沖液中的50%乙醇為受體介質，采用尼龍66合成膜開發并驗證，該方法具有良好的線性、精密度、靈敏度和穩健性。IVPT方法以豬皮作為人體皮膚的替代模型，生理鹽水為受體介質，旨在實現測試制劑與參比制劑的累積滲透率和滲透速率具有可比性。皮膚發白試驗分別納入18名和100名受試者。

結果：IVRT試驗中，洗劑的測試制劑與參比制劑90%置信區間為97.78%107.1%，乳膏為93.5%112.8%（符合75%133.33%的接受標準）；乳膏和洗劑的測試制劑與參比制劑均在24小時達到滲透速率（Jmax），其T/R比分別為100.0%和110.0%（90%置信區間符合80%125%標準）；累積滲透率的T/R比分別為95.2%（乳膏）和104.5%（洗劑）。滲透試驗后，乳膏測試制劑和參比制劑的平均回收率分別為97.4±7.7%和101.6±10.5%，洗劑分別為88.2±5.1%和86.8±3.9%。IVRT和IVPT結果均證實了生物等效性，皮膚發白試驗進一步驗證了測試制劑的生物等效性。

結論：研究結果表明，測試制劑與參比制劑具有相似的釋放和滲透特性，支持其在人體中的生物等效性。這種整合方法凸顯了IVRT和IVPT作為外用皮膚藥物制劑開發和體外生物等效性評估的可靠工具的應用價值。

實驗材料與儀器

材料

制劑：含0.05%地奈德的乳膏和洗劑。

試劑與化學品：所有用于IVRT和IVPT研究的試劑和化學品均為分析純，購自當地供應商。

皮膚樣本：1月齡巴馬仔豬的腹部前側皮膚。

儀器

透皮擴散系統、高效液相色譜儀、高效液相色譜-質譜聯用儀、ASCH VAPOSCAN經皮水分流失測量儀、冷凍研磨機、分光光度計。

實驗過程

IVRT方法開發與驗證

• 受體介質選擇：基于地奈德在不同介質中的溶解度和化學穩定性，篩選出pH 4.0醋酸緩沖液中的50%乙醇作為受體介質。

• 膜選擇：通過藥物回收率和雜質分析，確定尼龍66合成膜為適配膜。

• 采樣時間設定：設定0.5h、1h、2h、3h、4h、6h為采樣時間點，確保藥物釋放線性關系良好（R2≥0.97）。

• 方法驗證：對線性范圍、精密度、靈敏度、選擇性、回收率、質量平衡和穩健性等參數進行驗證，確認方法可靠。

IVPT方法實施

• 皮膚處理：仔豬腹部皮膚經脫毛、無菌分離后，-20℃冷凍儲存（有效期2個月），使用前恢復至室溫，切成直徑約3cm的圓盤，厚度控制在500±250μm，經TEWL分析（數值<25g/m2/h）確認皮膚完整性。

• 樣本設計：采用單劑量、兩處理、平行、每處理多重復設計，將測試和參比制劑隨機分配至A、B組。

• 試驗條件：受體介質為脫氣的pH 7.4磷酸鹽生理鹽水，溫度維持在34℃，攪拌速度600rpm，確保皮膚溫度穩定在32±1℃；采樣時間點為0h、2h、4h、8h、12h、24h，采樣后補充等量新鮮介質。

• 將皮膚固定于透皮擴散池并預先恒溫至 32 ℃±1 ℃后，使用ASCH VAPOSCAN經皮水分流失測量儀在皮片上等距取點完成三次平行測定，記錄經皮水分流失（TWEL）數值。經測定，CT 組、CR 組、LT 組和 LR 組的平均經皮水分流失結果（n=18）分別為 8.361±0.85、8.367±0.99、9.811±1.58 和 9.889±1.51，所有結果均符合本研究的預設標準。

ASCH VAPOSCAN經皮水分流失測量儀

• 藥物提取與分析：試驗結束后，刮取皮膚表面殘留制劑，提取皮膚中滲透的藥物，結合受體介質中的藥物含量，進行質量平衡計算。

皮膚發白試驗

• 初步研究：納入18名健康中國受試者，確定參比制劑的半數有效劑量持續時間。

• 主要研究：采用隨機、雙盲、安慰劑對照、單劑量、交叉試驗設計，納入100名健康受試者，在受試者前臂涂抹不同劑量的測試和參比制劑，于給藥后不同時間點通過分光光度計測量皮膚發白程度，評估藥代動力學終點。

分析方法驗證

• HPLC分析（IVRT樣本）：以pH 4.0醋酸溶液-乙醇（50:50）為稀釋劑，采用Zorbax Eclipse XDB-C8色譜柱，柱溫20℃，檢測波長245nm，流動相A（0.1%磷酸）與B（乙腈）比例58:42，流速1.0mL/min。

• LC-MS/MS分析（IVPT樣本）：采用ACE Excel 2 C18-AR色譜柱，柱溫40℃，流動相A（0.1%甲酸水溶液）與B（乙腈）梯度洗脫，流速0.3mL/min，電離模式為ESI+，MRM掃描模式。

實驗結論

本研究開發并驗證了地奈德乳膏和洗劑的IVRT和IVPT方法，兩種方法均表現出良好的可靠性和穩健性。IVRT和IVPT結果顯示，測試制劑與參比制劑的釋放和滲透特性具有可比性，90%置信區間均在生物等效性接受范圍內；皮膚發白試驗進一步證實了兩者在人體中的生物等效性。該研究確立的整合評估方法，不僅減少了外用制劑生物等效性研究對昂貴、耗時的臨床研究的依賴，還為仿制藥的安全性和有效性提供了有力保障，為外用類固醇制劑及其他外用皮膚藥物的仿制藥審批提供了高效、可靠的技術路徑。