熱電液相色譜(通常指高效液相色譜,HPLC)是一種重要的分析技術。
1.樣品引入與流動相驅動:樣品經進樣器進入系統后,由高壓泵將流動相(液體)持續輸送通過色譜柱。這是整個過程的起點,確保樣品能夠被準確地帶入分離環節。
2.分離機制核心——相互作用差異:色譜柱內裝有固定相,樣品中的不同組分因與固定相、流動相之間的相互作用(如吸附、分配等)強度不同,在色譜柱中的保留時間存在差異而被分離。例如在反相色譜中,親脂性強的組分更容易滯留在固定相的疏水基團上,分配/停留在固定相的時間長,流出色譜柱較慢,保留時間長;而親脂性弱的組分與固定相作用弱,容易被流動相沖走,在色譜柱中停留時間短,更早流出色譜柱,保留時間短。
3.檢測與信號轉換:分離后的各組分依次進入檢測器,檢測器將組分信號轉換為電信號。常見的檢測器包括紫外-可見光檢測器、熒光檢測器、質譜檢測器等,它們能夠檢測到不同特性的化合物。
4.數據處理與結果呈現:數據處理系統記錄并處理這些電信號,生成色譜圖,橫坐標為保留時間,縱坐標為檢測器響應值(峰高或峰面積),從而對樣品中的各組分進行定性和定量分析。
熱電液相色譜儀優點:
1.高效分離能力:液相色譜柱的選擇性和高效性使樣品中的各種組分能夠在極短的時間內得到有效分離。其填料具有高度的均勻性和穩定性,能夠提供較高的柱效和分辨率,可同時分析多種組分,并準確測定其含量。還可以通過改變流動相的組成、pH值、溫度等條件來優化分離效果。
2.高選擇性:通過選擇合適的固定相和流動相組合,能夠實現高度選擇性的分離。不同的化合物在固定相和流動相之間的分配系數不同,可根據待測樣品的特性進行針對性的選擇。并且現代液相色譜儀還常與其他分析儀器聯用,如質譜儀等,以進一步提高選擇性和定性定量的準確性。
3.高靈敏度:配備高靈敏度的檢測器,如紫外可見光檢測器、熒光檢測器、蒸發光散射檢測器等,能夠檢測到極低濃度的化合物,適用于痕量分析和超微量分析,對于環境樣品中污染物的監測和藥物研發中的微量成分分析等非常重要。
4.自動化程度高:大多數HPLC系統配備有自動進樣器、自動清洗裝置等自動化部件,能夠自動完成樣品的進樣、分析、數據處理和結果報告等全過程,減少了人為操作的誤差,提高了實驗的重復性和可比性,同時也大大減輕了研究人員的負擔。