隱形威脅：內(nèi)毒素如何影響細(xì)胞培養(yǎng)，HEPES的選擇？

在細(xì)胞培養(yǎng)中，你是否遇到過(guò)【細(xì)胞狀態(tài)突然下滑，原因不明】 、【實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)法重復(fù)，數(shù)據(jù)波動(dòng)巨大】、【細(xì)胞增殖緩慢，傳代周期延長(zhǎng)】、【細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)異常結(jié)果】。這些困擾可能正源于一個(gè)隱形威脅：內(nèi)毒素污染。

內(nèi)毒素，本質(zhì)為磷脂多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物，其毒性成分主要為類脂質(zhì)A。這種微小的分子，雖然肉眼不可見，卻能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生巨大的影響。

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，內(nèi)毒素的污染可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、細(xì)胞毒性增加，甚至影響瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的效率。更具體地說(shuō)，內(nèi)毒素會(huì)激活細(xì)胞的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）等的釋放。這些炎癥因子可以影響細(xì)胞的生理功能，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的紊亂，甚至可能引發(fā)細(xì)胞凋亡。當(dāng)細(xì)胞處于免疫激活狀態(tài)時(shí)，它們可能會(huì)減緩生長(zhǎng)，因?yàn)樾枰獙①Y源用于炎癥反應(yīng)而非分裂增殖。此外，內(nèi)毒素可能干擾細(xì)胞的代謝途徑，影響蛋白質(zhì)合成、DNA合成等關(guān)鍵過(guò)程。

對(duì)于進(jìn)行細(xì)胞功能研究（如細(xì)胞因子分泌、藥物敏感性評(píng)估或誘導(dǎo)分化）的科研人員來(lái)說(shuō)，內(nèi)毒素的影響更為隱蔽：它可能導(dǎo)致細(xì)胞異常分泌IL-6、TNF-α等炎癥因子，造成ELISA檢測(cè)出現(xiàn)“假陽(yáng)性”。

此外，內(nèi)毒素的“起效劑量”極低——只要培養(yǎng)液中內(nèi)毒素含量超過(guò)0.1 EU/mL，即可顯著激活免疫細(xì)胞，引發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。

內(nèi)毒素污染的來(lái)源與檢測(cè)

內(nèi)毒素污染時(shí)有發(fā)生且不易察覺，血清、培養(yǎng)液、緩沖液及配制用水等都可能是污染源。

目前，內(nèi)毒素的檢測(cè)采用鱟試劑法（LAL），包括凝膠法及光度測(cè)定法兩大類。

近年來(lái)，也出現(xiàn)了電化學(xué)適配體傳感器等新興檢測(cè)技術(shù)，靈敏度較傳統(tǒng)方法有顯著提高。

但預(yù)防始終勝于治療，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)試劑和操作環(huán)境中的內(nèi)毒素水平，才是保障細(xì)胞培養(yǎng)成功的根本之道。

HEPES的選擇與質(zhì)量控制

在細(xì)胞培養(yǎng)體系中，緩沖液的選擇對(duì)于控制內(nèi)毒素污染至關(guān)重要。HEPES作為一種常用的生物緩沖劑，其內(nèi)毒素水平直接影響細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果。

在原代細(xì)胞培養(yǎng)、干細(xì)胞研究和細(xì)胞治療等對(duì)質(zhì)量要求非常高的應(yīng)用中，可以選擇符合注射劑級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)的 HEPES 產(chǎn)品。這類產(chǎn)品通常經(jīng)過(guò)更嚴(yán)格的質(zhì)量控制，包括內(nèi)毒素檢測(cè)等關(guān)鍵指標(biāo)，能夠更好地滿足細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量要求。

AVT 的 HEPES 作為通過(guò)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局關(guān)聯(lián)審評(píng)的注射級(jí) A 狀態(tài)產(chǎn)品，代表著其質(zhì)量達(dá)到了高標(biāo)準(zhǔn)、嚴(yán)要求。該產(chǎn)品內(nèi)毒素含量嚴(yán)格控制在＜0.01 EU/mg，遠(yuǎn)優(yōu)于常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中 0.1 EU/mL 的控制要求。對(duì)于從事原代細(xì)胞培養(yǎng)、干細(xì)胞研究以及細(xì)胞治療相關(guān)實(shí)驗(yàn)的科研人員而言，選擇這款超低內(nèi)毒素 HEPES 不僅能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，更是推動(dòng)科研成果向臨床轉(zhuǎn)化的重要保障。

隨著細(xì)胞治療領(lǐng)域的快速發(fā)展，對(duì)試劑質(zhì)量的要求也將不斷提高。嚴(yán)格控制內(nèi)毒素水平，既是保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠性的基礎(chǔ)，也是推動(dòng)科研成果向臨床轉(zhuǎn)化的重要保障。