原代細胞的傳代操作過程

來源：上海撫生實業有限公司 2025年04月21日 13:26

　　原代細胞是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養的細胞，稱為原代細胞。

　　原代培養原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。

　　一般認為，培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細抱培養。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞瘍變、細胞工程等問題的研究。

　　那么關于原代細胞的傳代培養，一般有以下兩種方法，具體操作步驟：

　　一、貼壁細胞的消化法傳代

　　1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。

　　2、加入1ml左右消化液(胰蛋白鱷或與EDTA混合液)輕輕接動培養瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中.

　　3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發現原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養液終止消化。

　　4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養瓶中，置37℃培養箱中繼續培養.第二天觀察貼壁生長情況。

　　二、懸浮細胞的傳代

　　1、直接傳代

　　①讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。

　　②用吸管吹打形成細胞懸液后，分別接種到另外兩到三個培養瓶中，置37℃培養箱中培養。

　　2、離心法傳代

　　①將細胞連同培養液一并轉移到離心管內，離心800-1 OOOrpm, 5分鐘。

　　②去除上清，加新的培養液到離心管內，用吸管吹打使之形成細胞懸液。

　　③將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養瓶中，置37℃培養箱中培養。

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