超濾法制備外泌體 | Amicon® Ultra超濾管應(yīng)用方案

1、將培養(yǎng)基上清從培養(yǎng)瓶中轉(zhuǎn)移到50ml錐形管中；

2、旋緊Steriflip^®組件（貨號:SCGP00525，0.22µm，PES膜）至樣品管頂部，打開樣品管末端；

3、倒置組件并固定在基座或架子上；

4、將調(diào)節(jié)真空源連接到Steriflip^®裝置側(cè)面的真空端口上。打開真空使溶液通過膜進(jìn)入空管；

5、拆下Steriflip^®裝置并蓋上樣品。將過濾后的樣品保存在4°C或進(jìn)行囊泡富集。

本離心超濾方案基于使用AU-15超濾管（10kDa MWCO，#UFC901024） 處理15mL樣品。如果要使用不同的體積或超濾管規(guī)格（AU-0.5，AU -2或AU-4mL），請參閱相應(yīng)的Amicon^®Ultra超濾管使用說明書。

2、移去超濾裝置底部未過濾的PBS，抽取收集管里的濾液。

• 對于AU-2、AU-4和AU-15，可通過移液器去除濾液。
• 對于AU-0.5，可1000 x g 反轉(zhuǎn)離心2分鐘去除濾液，移除收集管中PBS或更換新的收集管。

1、像AU-15超濾管中加入15ml樣品，蓋上蓋子；

2、 4,000xg離心30分鐘；

備注：終產(chǎn)品體積通常大約500µL（30倍濃度），但根據(jù)樣品的性質(zhì)、流速和離心時間可能會有所不同。有關(guān)樣品體積和終體積的估計，請參閱對應(yīng)Amicon^®Ultra超濾管使用說明書。

3、從離心機(jī)上取下超濾裝置，棄除收集管里的液體；

4、往過濾裝置中加入14mL PBS，移液器輕輕吸吐多次。4,000xg離心30分鐘；
5、從過濾裝置中回收濃縮樣品；
• 對于AU-2、AU-4和AU-15，可用移液器吸取樣品，并多次沖洗膜側(cè)壁（每側(cè)3-4次）以確保回收。
• 對于AU-0.5，將過濾器倒扣在干凈的離心管中。在2000xg下離心1分鐘，將樣品轉(zhuǎn)移到試管（反向旋轉(zhuǎn)）。

6、細(xì)胞外囊泡樣品準(zhǔn)備好進(jìn)行分析。