酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。基本原理它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應,用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測定方法中有3種必要的試劑:
1、固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)
2、酶標記的抗原或抗體(標記物)
3、酶作用的底物(顯色劑)測量時,抗原(抗體)先結合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然后加一種抗體(抗原)與酶結合成的偶聯(lián)物(標記物),此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應結合后,再加上酶的相應底物,即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單,方便迅速,特異性強。
ELISA試劑盒特點:
一、特異性
ELISA試劑盒的特異性與試劑盒的要害組分,抗體對有關。若抗體對中為多抗,另一個有必要為單抗,建議運用雙單抗。挑選一個好的ELISA試劑盒,咱們首先要考慮的就是特異性。
二、靈敏度
ELISA試劑盒的好壞往往就取決于靈明度的高低,因而靈敏度也是咱們挑選ELISA試劑盒的一個重要技術參數(shù)。靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質的量的才能,用戶可根據(jù)自己樣本中待檢目標的量挑選合適的試劑盒,假如待檢目標量很低,一般的試劑盒不能滿足要求,可挑選高敏的ELISA試劑盒。
三、重復性
科學實驗講究重復性,一般 ELISA試劑盒,其板內和板間變異系數(shù)應該控制在 15% 以內。
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